咨询电话 0514-86166160

行业资讯

流式细胞仪的使用注意事项

发布时间:2017-05-31 15:58:08 浏览人数:

流式细胞仪的使用注意事项 流式细胞仪的使用注意事项   1、流式细胞仪的检测范围  1.流式细胞仪可以检测细胞结构,包括:细胞大小、细胞粒度、细胞表面面积、核浆比例、DNA含量与细胞周期、R NA 含量、蛋白质含量。  2.流式细胞仪可以检测细胞功能,包括:细胞表面/ 胞浆/ 核的特异性抗原、细胞活性、细胞内细胞因子、酶活性、激素结合位点和细胞受体。 www.labdd.com  2、流式细胞仪的临床利用  1.流式细胞术在肿瘤学中的利用:流式细胞术可以检测肿瘤细胞增殖周期、检测肿瘤细胞表面标记、癌基因表达产物、进行多药耐药性分析、检测凋亡;  2.流式细胞术在血液学中的利用:检测白血病和淋巴瘤细胞、活化血小板、造血干细胞(CD34+)计数、白血病与淋巴瘤的免疫分型、网织红细胞计数、细胞移植的交叉配型和免疫状态监测;  3.流式细胞术在免疫学中的利用:可以进行淋

  1、流式细胞仪的检测范围

  1.流式安全帽实验机细胞仪可以检测细胞结构,包括:细胞大小、细胞粒度、细胞表面面积、核浆比例、DNA含量与细胞周期、R NA 含量、蛋白质含量。

  2.流式细胞仪可以检测细胞功能,包括:细胞表面/ 胞浆/ 核的特异性抗原、细胞活性、细胞内细胞因子、酶活性、激素结合位点和细胞受体。 www.labdd.com

  2、流式细胞仪的临床利用

  1.流式细胞术在肿瘤学中的利用:流式细胞术可以检测肿瘤细胞增殖周期、检测肿瘤细胞表面标记、癌基因表达产物、进行多药耐药性分析、检测凋亡;

  2.流式细胞术在血液学中的利用:检测白血病和淋巴瘤细胞、活化血小板、造血干细胞(CD34+)计数、白血病与淋巴瘤的免疫分型、网织红细胞计数、细胞移植的交叉配型和免疫状态监测;

  3.流式按键荷重曲线实验机细胞术在免疫学中的利用:可以进行淋巴细胞及其亚群分析、淋巴细胞免疫分型、检测细胞因子。

  3、流式细胞仪的科研利用

  主要有细胞动力学功能研究、环境微生物分析、流式细胞术与份子生物学研究。

  www.labdd.com

  4、流式混凝土干湿循环实验机细胞术常规检测时的样品制备

  (1) 直接免疫荧光标记法

  取1定量细胞(约1 × 106 细胞/ml ),直接加入连接有荧光素的抗体进行免疫标记反应(如做双标或多标染色,可把几种标记有不同荧光素的抗体同时加入),孵育20⑹0分钟后,用PBS(pH7.2 - 7.4)洗1⑵ 次,加入缓冲液重悬,上机检测。本方法操作简便,结果准确,易于分析,适用于同1细胞群多参数同时测定。虽然直标抗体试剂本钱较高,但箱包紧缩实验机减少了间接标记法中较强的非特异荧光的干扰,因此更适用于临床标本的检测。 检验地带网

  (2) 间接免疫荧光标记法

  取1定量的细胞悬液(约1X106 细胞/ml ),先加入特异的第1抗体,待反应完人造板万能实验机全后洗去未结合抗体,再加入荧光标记的第2抗体,生成抗原-抗体-抗抗体复合物,以FCM检测其上标记的荧光素被激起后发出的荧光。本方法费用较低,2抗利用广泛,多用于科研标本的检测。但由于2抗1般为多克隆抗体,特异性较差,非特异性荧光背景较强,易影响实验结果。所以标本制备时应加入阴性或阳性对比。另元创力科技液压振动实验机外,由于间标法步骤较多,增加了细胞的丢失,不适用测定细胞数较少的标本。

  5、质量控制和注意事项

  流式细胞仪并不是是滑动轴承实验机完全自动化的仪器,准确的实验结果还需要准确的人工技术配合,所以标本制备需要规范,仪器本家具寿命实验机身亦需要质量控制。

  (1)流式细胞术免疫学检测的影响因素和质量控制

  流式细胞术在免疫学中有着广泛的利用,其免疫荧光染色的标本制备非常重要,常常由于标本制备进程中出现人为非特异性荧光干扰(特别在间接免疫荧光染色中)或细胞浓度低等影响检测结果。解决这些影响因素的方法以下:

  (1) 确保标本上机检测前的浓度为1 X 106 /ml,细胞浓度太低直接影响检测结果。

  (2) 使用蛋白封闭剂,封闭非特异结合位点,特别在间接免疫荧光标记时必不可少。经常使用的蛋白封闭办冲水实验机公椅1次冲击实验机剂为0.5%牛血清手动冲击实验机白蛋白和1 %胎牛血清。 www.labdd.com

  (3) 荧光抗体染色后充分洗涤,注意混匀和离心速度,减少堆叠细胞和细胞碎片。

  (4) 设置对比样品,采取与抗体来源同型匹配的无关对比和荧光抗体的本底对比。

  (5) 判定结果时,应注意减去本底荧光,为使免疫荧光的定量分析更精确,利用计算机程序App,用拟合曲线方法从实验组的曲线峰值中减去对比组的曲线峰值,可以得到更准确的免疫荧光定量结果。

  (6) 注意染色后避光,保证细胞免疫荧光的稳定。

  (2)DNA 倍体分析的质量控制仍没有统1的标准, 各文献报导的实验结果差异较大,1 9 9 3 年1 0 月美国癌症研究组织制定了FCMDNA 测定的统1标准,大家根据这些标准并结合国内有经验的专家多年的实践,对FCM 的DNA 分析技术的质控和注意事项进行说明。

  (1) 手术切除的新鲜标本或活检针吸标本取材时,要避免出血坏死组织。

  (2) 标本收集后要及时固定或深低温保存,以避免组织产生自溶,D NA 降解,而造成测试结果的误差。

  (3) 固定剂要采取对组织细胞穿透性强的浓度,70%的乙醇固定效果较好。

  (4) 单细胞悬液制备进程中,注意将待测细胞成份分离出来,减少其他成份的干扰,并注意不要损伤该群细胞。

  (5) 细胞样品的收集要保证足够的细胞浓度,即1X106 /ml,杂质、碎片、团块和堆叠细胞应 <2%,对肿瘤细胞DNA异倍体的分析样品,最少有20 %的肿瘤细胞存在。(6) 石蜡包埋组织单细胞制备时要注意:取材时应选取无自溶、坏死的组织,对肿瘤组织标本,选取含肿瘤细胞丰富的区域;石蜡组织片的厚度要适合,最好为40⑸0 μm 。过薄或过厚的切片均会影响检测结果;完全脱蜡,以避免残留的石蜡影响酶的消化活性,验证脱蜡是不是完全的方法是弃去2甲苯,加入100%乙醇,如

  www.labdd.com

  果无絮状物浮起,说明蜡已脱净;水化要安全帽冲击穿刺实验机充分,使组织还原到与新鲜组织类似的状态;注意消化的时间和消化酶的活性。常规使用0.5%胃蛋白酶,pH 1.5。

  ( 3) 操作方面

  (1) 流式细胞仪在全部工作进程中处于最好状态,能保证定量检测的准确性和检测精度。使用标准样品调剂仪器的变异系数在最小范围,分辨率在最好状态,能避免在丈量进程中仪器条件的变化引发的检测误差。

  (2) 评价仪器精度的重要指标是仪器的变异系数(CV),对校准样品,其CV值越小越好,CV值越小,说明仪器校订的精度越高。校准样品包括非生物样品(荧光微球)和生物细胞样品( 人淋巴细胞、鸡红细胞等) 。目前,非生物荧光微球已有商品试剂紧固件横向振动实验机,CV1般<2整箱耐压实验机%⑶%。

  (4) 资料分析方面

  (1) 当样品中碎片杂质或团块过量,所测细胞数在20%以下,组方图的基线抬高时,应放弃分析处理。

  (2) 做细胞周期分析时,样品细胞数应在1 万个,排除碎片、杂质和团块,当异倍体细胞数占总细胞数10 %以下时,需要结合其他诊断指标,不可盲目下结论,最少异倍体细胞占总细胞数的20 %以上,可以肯定异倍体的存在。

  (3) DNA分析时,正常2倍体活性炭转鼓实验机细胞组方图CV值>8%时放弃分析,但肿瘤细胞的CV值>8%,与肿瘤细胞的异质性有关。另外,DNA倍体分析时,同源组织的不同个体会出现1 0 %的漂移。 www.labdd.com

  (4 )DNA倍体标准的质量控制,采取相同个体同源正常组织、一样固定方法、相同的样品处理方法、相同的染色方法、同步染色、一样的仪器检测条件、正常的2倍体组织作为内标准。

流式细胞仪的使用注意事项
XML 地图 | Sitemap 地图